Оптималдуу концентрацияны кантип аныктоого болот?
Индуктор IPTG (изопропил-бета-д-тиогалактозид) үчүн концентрация канчалык жогору болсо, ошончолук жакшы.Оптималдуу концентрация конкреттүү эксперименттик шарттарга жана каалаган индукциялык эффектке көз каранды.
Жалпысынан IPTG концентрациясы 0,1-1 мМ диапазондо колдонулат.Төмөнкү концентрациялар клетканын өсүшүнө терс таасирин азайтат жана максаттуу протеиндердин ашыкча экспрессиясынан улам цитотоксикацияны азайтышы мүмкүн.Жогорку концентрациялар клетканын өсүшүнө жана экспрессия натыйжалуулугуна таасирин тийгизип, ашыкча клетканын метаболикалык жүгүн алып келиши мүмкүн.
Оптималдуу концентрацияны аныктоонун жолу ар кандай концентрацияларда IPTG индукциялык тесттерди жүргүзүү аркылуу максаттуу белоктун экспрессия деңгээлин баалоо болушу мүмкүн.Чакан масштабдуу маданий тесттер IPTG концентрацияларынын диапазонунда (мисалы, 0,1 мм, 0,5 мм, 1 мМ ж.б.) колдонуу менен жүргүзүлүшү мүмкүн жана ар кандай концентрациялардагы экспрессия эффектиси максаттуу протеиндин экспрессия деңгээлин аныктоо аркылуу бааланышы мүмкүн (мисалы, Батыш блот же флуоресценцияны аныктоо).Эксперименттик натыйжалар боюнча оптималдуу концентрация катары эң жакшы экспрессия эффектиси менен концентрация тандалды.
Мындан тышкары, сиз ошондой эле окшош эксперименталдык шарттарда көп колдонулган IPTG топтолуу диапазонун түшүнүү үчүн тиешелүү адабияттарга же башка лабораториялардын тажрыйбасына кайрыла аласыз, андан кийин оптималдаштыруу жана эксперименталдык муктаждыктарга ылайык жөнгө салуу.
Оптималдуу концентрация ар кандай экспрессия системаларына, максаттуу белокторго жана эксперименталдык шарттарга жараша өзгөрүшү мүмкүн экенин белгилей кетүү маанилүү, ошондуктан ар бир учур боюнча оптималдаштыруу жакшы.
Посттун убактысы: 28-сентябрдан 2023-жылга чейин