4-Нитрофенил бета-D-галактопиранозид CAS:200422-18-0

Таасири: ONPG - бул β-галактозидаза ферментинин бар экендигин жана активдүүлүгүн аныктоо үчүн атайын колдонулган субстрат. β-галактозидаза ферменти бар болгондо жана активдүү болгондо, ал ONPGди эки продуктка бөлөт: о-нитрофенол жана галактозанын туундусу. О-нитрофенолдун бөлүнүп чыгышы сары түстүн өзгөрүшүнө алып келет, аны спектрофотометр менен өлчөөгө болот.

Колдонулушу: ONPG молекулярдык биология жана биохимия изилдөөлөрүндө бир нече колдонмолорго ээ:

β-галактозидаза активдүүлүгүн аныктоо: ONPG көбүнчө β-галактозидаза ферментинин активдүүлүгүн өлчөө жана сандык жактан аныктоо үчүн колдонулат. Ферменттин активдүүлүгүнө түз пропорционалдуу болгон о-нитрофенолдун пайда болуу ылдамдыгын спектрофотометриялык жол менен өлчөөгө болот.

Ген экспрессиясы жана жөнгө салуу: ONPG көбүнчө ген экспрессиясын жана жөнгө салууну изилдөөгө байланыштуу эксперименттерде колдонулат. Ал белгилүү бир промоторлордун көзөмөлүндөгү гендердин экспрессиясын изилдөө үчүн кеңири колдонулган lacZ синтез системасы сыяктуу протеин синтезинин анализдеринде көп колдонулат. ONPG менен өлчөнгөн бета-галактозидаза активдүүлүгү ген экспрессиясынын деңгээли жөнүндө түшүнүк берет.

β-галактозидаза активдүүлүгүнө скрининг: ONPG рекомбинанттык ДНК технологиясында β-галактозидазаны коддогон LacZ генинин бар экендигин жана функционалдуулугун аныктоо үчүн колориметриялык скрининг ыкмасы катары колдонулушу мүмкүн. Бул скрининг ыкмасы кызыктырган генди камтыган клондорду аныктоого жардам берет.

Фермент кинетикасын изилдөө: ONPG β-галактозидаза ферментинин кинетикасын изилдөөдө да пайдалуу. Ар кандай субстрат концентрацияларында фермент-субстрат реакциясынын ылдамдыгын өлчөө менен Михаэлис-Ментен константалары (Km) жана максималдуу реакция ылдамдыктары (Vmax) сыяктуу кинетикалык параметрлерди аныктоого болот.