Dithiothreitol (DTT) ошондой эле жаңы жашыл кошулма катары белгилүү, көп колдонулган азайтуучу агент болуп саналат.Бул эки меркаптан тобу (-SH) менен чакан молекулалык органикалык бирикме болуп саналат.Өзүнүн төмөндөтүүчү касиеттери жана туруктуулугу үчүн ДТТ биохимия жана молекулярдык биология эксперименттеринде кеңири колдонулат.
DTT негизги ролу белоктордун жана башка биомолекулалардын дисульфиддик байланыштарды азайтуу болуп саналат.Дисульфиддик байланыш белоктун бүктөлүшүнүн жана туруктуулугунун маанилүү бөлүгү болуп саналат, бирок кээ бир эксперименталдык шарттарда, мисалы, кыскартылуучу SDS-PAGE анализи, белоктун рекомбинациясы жана бүктөлүшү, дисульфиддик байланышты эки тиолдук топко чейин төмөндөтүү зарыл. белок.DTT дисульфиддик байланыштар менен реакцияга кирип, аларды меркаптан топторуна чейин азайта алат, ошентип белоктун мейкиндик структурасын ачып, аны талдоо жана башкарууну жеңилдетет.
DTT ферменттин активдүүлүгүн жана туруктуулугун коргоо үчүн да колдонсо болот.Кээ бир фермент катализделген реакцияларда ферменттин активдүүлүгү оксидант тарабынан төмөндөтүлүшү мүмкүн.DTT оксиданттар менен реакцияга кирип, аларды зыянсыз заттарга чейин азайтат, ошону менен ферменттин активдүүлүгүн жана туруктуулугун коргойт.
Мындай β-mercaptoetanol (β-ME) сыяктуу салттуу азайтуу агенттер менен салыштырганда, DTT коопсуз жана туруктуу кыскартуу агенти болуп эсептелет.Ал суудагы эритмеде гана туруктуу эмес, ошондой эле жогорку температурада жана кислота-негиздик шарттарда өзүнүн калыбына келтирүүчү касиеттерин сактайт.
DTT колдонуу салыштырмалуу жөнөкөй.Жалпысынан алганда, DTT тиешелүү буферде эритип, андан кийин эксперименталдык системага кошулат.ДТТ оптималдуу концентрациясын конкреттүү экспериментке ылайык аныктоо керек жана жалпысынан 0,1-1мМ диапазондо колдонулат.Төмөнкү концентрациялар клетканын өсүшүнө терс таасирин азайтат жана максаттуу протеиндердин ашыкча экспрессиясынан улам цитотоксикацияны азайтышы мүмкүн.Жогорку концентрациялар клетканын өсүшүнө жана экспрессия натыйжалуулугуна таасирин тийгизип, ашыкча клетканын метаболикалык жүгүн алып келиши мүмкүн.
Оптималдуу концентрацияны аныктоонун жолу ар кандай концентрацияларда IPTG индукциялык тесттерди жүргүзүү аркылуу максаттуу белоктун экспрессия деңгээлин баалоо болушу мүмкүн.Чакан масштабдуу маданий тесттер IPTG концентрацияларынын диапазонунда (мисалы, 0,1 мм, 0,5 мм, 1 мМ ж.б.) колдонуу менен жүргүзүлүшү мүмкүн жана ар кандай концентрациялардагы экспрессия эффектиси максаттуу протеиндин экспрессия деңгээлин аныктоо аркылуу бааланышы мүмкүн (мисалы, Батыш блот же флуоресценцияны аныктоо).Эксперименттик натыйжалар боюнча оптималдуу концентрация катары эң жакшы экспрессия эффектиси менен концентрация тандалды.
Мындан тышкары, сиз ошондой эле окшош эксперименталдык шарттарда көп колдонулган IPTG топтолуу диапазонун түшүнүү үчүн тиешелүү адабияттарга же башка лабораториялардын тажрыйбасына кайрыла аласыз, андан кийин оптималдаштыруу жана эксперименталдык муктаждыктарга ылайык жөнгө салуу.
Оптималдуу концентрация ар кандай экспрессия системаларына, максаттуу белокторго жана эксперименталдык шарттарга жараша өзгөрүшү мүмкүн экенин белгилей кетүү маанилүү, ошондуктан ар бир учур боюнча оптималдаштыруу жакшы.
Жыйынтыктап айтканда, DTT протеиндердеги жана башка биомолекулалардагы дисульфиддик байланыштарды азайтуу жана ферменттин активдүүлүгүн жана туруктуулугун коргоо үчүн колдонулушу мүмкүн болгон редукциялоочу агент.Ал биохимия жана молекулярдык биология эксперименттеринде кеңири колдонулат.
Посттун убактысы: 28-сентябрдан 2023-жылга чейин