Дитиотреитол (ДТТ) – кеңири колдонулган калыбына келтирүүчү агент, ошондой эле жаңы жашыл кошулма катары белгилүү. Ал эки меркаптан тобу (-SH) бар кичинекей молекулярдык органикалык кошулма. Калыбына келтирүүчү касиеттери жана туруктуулугунан улам, ДТТ биохимия жана молекулярдык биология эксперименттеринде кеңири колдонулат.
ДТТнын негизги ролу - белоктордогу жана башка биомолекулалардагы дисульфиддик байланыштарды азайтуу. Дисульфиддик байланыш белоктун бүктөлүшүнүн жана туруктуулугунун маанилүү бөлүгү болуп саналат, бирок SDS-PAGE анализи, белоктун рекомбинациясы жана бүктөлүшү сыяктуу айрым эксперименталдык шарттарда белоктун мейкиндик түзүлүшүн ачуу үчүн дисульфиддик байланышты эки тиол тобуна чейин азайтуу зарыл. ДТТ дисульфиддик байланыштар менен реакцияга кирип, аларды меркаптан топторуна чейин азайта алат, ошону менен белоктун мейкиндик түзүлүшүн ачып, аны талдоону жана манипуляциялоону жеңилдетет.
ДТТ ферменттин активдүүлүгүн жана туруктуулугун коргоо үчүн да колдонулушу мүмкүн. Айрым фермент катализдөөчү реакцияларда ферменттин активдүүлүгү кычкылдандыруучу зат тарабынан төмөндөшү мүмкүн. ДТТ кычкылдандыруучу заттар менен реакцияга кирип, аларды зыянсыз заттарга чейин калыбына келтирип, ошону менен ферменттин активдүүлүгүн жана туруктуулугун коргой алат.
β-меркаптоэтанол (β-ME) сыяктуу салттуу калыбына келтирүүчү агенттерге салыштырмалуу, ДТТ коопсуз жана туруктуу калыбына келтирүүчү агент деп эсептелет. Ал суу эритмесинде гана туруктуу болбостон, жогорку температурада жана кислота-негиз шарттарында калыбына келтирүүчү касиеттерин да сактайт.
ДТТны колдонуу салыштырмалуу жөнөкөй. Жалпысынан алганда, ДТТ тиешелүү буферде эритилет, андан кийин эксперименталдык системага кошулат. ДТТнын оптималдуу концентрациясы конкреттүү экспериментке ылайык аныкталышы керек жана жалпысынан 0,1-1 мМ диапазонунда колдонулат. Төмөнкү концентрациялар клетканын өсүшүнө терс таасирин азайтып, максаттуу белоктордун ашыкча экспрессиясынан улам цитотоксикалыкты азайтышы мүмкүн. Жогорку концентрациялар клетканын зат алмашуусунун ашыкча жүктөмүнө алып келип, клетканын өсүшүнө жана экспрессиянын натыйжалуулугуна таасир этиши мүмкүн.
Оптималдуу концентрацияны аныктоонун жолу - ар кандай концентрацияларда IPTG индукциялык сыноолорун жүргүзүү менен максаттуу белоктун экспрессия деңгээлин баалоо. Чакан масштабдуу культуралык сыноолорду IPTG концентрацияларынын диапазонун (мисалы, 0,1 мМ, 0,5 мМ, 1 мМ ж.б.) колдонуу менен жүргүзүүгө болот, ал эми ар кандай концентрациялардагы экспрессия эффектин максаттуу белоктун экспрессия деңгээлин аныктоо менен баалоого болот (мисалы, Вестерн-блот же флуоресценцияны аныктоо). Эксперименталдык жыйынтыктарга ылайык, эң жакшы экспрессия эффектине ээ концентрация оптималдуу концентрация катары тандалып алынган.
Мындан тышкары, окшош эксперименталдык шарттарда кеңири колдонулган IPTG концентрациясынын диапазонун түшүнүү үчүн тиешелүү адабияттарга же башка лабораториялардын тажрыйбасына кайрылып, андан кийин эксперименталдык муктаждыктарга ылайык оптималдаштырып жана тууралай аласыз.
Оптималдуу концентрация ар кандай экспрессия системаларына, максаттуу белокторго жана эксперименталдык шарттарга жараша өзгөрүшү мүмкүн экенин белгилей кетүү маанилүү, андыктан ар бир учурду өзүнчө карап оптималдаштыруу жакшы.
Кыскасы, ДТТ - белоктордогу жана башка биомолекулалардагы дисульфиддик байланыштарды азайтуу жана ферменттердин активдүүлүгүн жана туруктуулугун коргоо үчүн колдонулуучу кеңири колдонулган калыбына келтирүүчү агент. Ал биохимия жана молекулярдык биология эксперименттеринде кеңири колдонулган.
Жарыяланган убактысы: 2023-жылдын 28-сентябры