Айланабызда катардагыдай көрүнгөн, бирок чындыгында бизге көп салым кошкон көптөгөн атактуу эмес баатырлар бар. Протеиназа К молекулярдык диагностика тармагындагы "атактуу эмес баатыр", бирок тармактагы "чоң жана күчтүү" менен салыштырганда, протеиназа К ушунчалык жөнөкөй болгондуктан, биз анын маанисин көптөн бери этибарга албай келгенбиз. Жаңы таажы эпидемиясынын чыгышы менен протеиназа Кга болгон суроо-талап кескин өстү, ал эми үйдө жана чет өлкөлөрдө сунуш керектөөдөн бир топ артта калды жана баары күтүүсүздөн протеиназа К абдан маанилүү экенин түшүнүштү.
Протеиназа К эмне үчүн колдонулат?
Протеиназа К – протеолитикалык ферменттик активдүүлүгү бар серин протеазасы жана ар кандай чөйрөлөрдө (рН (4-12,5), туздун көп болушу, 70°C жогорку температура ж.б.) активдүүлүгүн сактай алат. Мындан тышкары, протеиназа Кнын активдүүлүгү SDS, мочевина, ЭДТА, гуанидин гидрохлориди, гуанидин изотиоцианаты ж.б. менен басылбайт, ошондой эле белгилүү бир өлчөмдөгү жуучу каражат протеиназа Кнын активдүүлүгүн жогорулатат. Медициналык дарылоодо (вирус жана микробдук дезинфекция), тамак-ашта (этти жумшартуу), териде (чачты жумшартуу), шарап жасоодо (спирт менен тазалоо), аминокислоталарды даярдоодо (жүндөр бузулганда), нуклеин кислотасын экстракциялоодо, жер-жерлерде гибриддештирүүдө ж.б. протеиназа К колдонулушу бар. Эң көп колдонулган колдонулушу – нуклеин кислотасын экстракциялоо.
Протеиназа К үлгүдөгү бардык түрдөгү белокторду, анын ичинде нуклеин кислоталары менен тыгыз байланышкан гистондорду ферменттештире алат, ошентип нуклеин кислоталары үлгүдөн бөлүнүп чыгып, экстрактка чыгарылып, экстракциянын жана тазалоонун кийинки кадамын жеңилдетет. Вирустук нуклеин кислотасын аныктоодо протеиназа К вирустун үлгү алуу эритмесиндеги маанилүү компоненттердин бири болуп саналат. Протеиназа К вирустун кабык протеинин жарып, активдештире алат, бул ташуу жана аныктоо этабында коопсуз; мындан тышкары, протеиназа К РНазаны да ыдырата алат, вирустук РНКнын ыдырашынын алдын алат жана нуклеин кислотасын аныктоону жеңилдетет.
Протеиназа Кнын бир түнгө белгилүүлүгү
Илимий изилдөө жаатындабы же IVD жаатындабы, нуклеин кислотасын бөлүп алуу эң негизги эксперимент болуп саналат, ошондуктан протеиназа К ар дайым абдан маанилүү болгон. Бирок, мурда протеиназа К анын ролуна караганда алда канча аз белгилүү болгон. Мунун көпчүлүгү протеиназа Кнын сунуш жана суроо-талап мамилеси абдан туруктуу болгондуктан болгон. Протеиназа Кнын жеткирилиши көйгөй жаратат деп аз эле адамдар ойлошот.
Жаңы таажы эпидемиясынын башталышы менен нуклеин кислотасын текшерүүгө болгон суроо-талап кескин өстү. 2020-жылдын июнь айынын аягына карата Кытайда дээрлик 90 миллион жаңы таажы сыноолору жүргүзүлдү жана бул сан дүйнөлүк масштабда ого бетер кооптуу. Нуклеин кислотасын экстракциялоо эксперименттеринде протеиназа Кнын жумушчу концентрациясы болжол менен 50-200 мкг/мл түзөт. Жалпысынан алганда, нуклеин кислотасынын үлгүсүн алуу үчүн болжол менен 100 мкг протеиназа К талап кылынат. Иш жүзүндө колдонууда, нуклеин кислотасын экстракциялоонун натыйжалуулугун жогорулатуу үчүн, көбүнчө протеиназа К көбөйгөн өлчөмдө колдонулат. Жаңы коронавирустун нуклеин кислотасын аныктоо протеиназа Кга болгон көп суроо-талапты алып келди. Протеиназа Кнын баштапкы сунуш жана суроо-талап балансы тез эле бузулуп, протеиназа К бир түндө эпидемиянын алдын алуудагы маанилүү материалга айланды.
Протеиназа К өндүрүшүндөгү кыйынчылыктар
Эпидемия өнүккөн сайын протеиназа Кнын маанилүү баалуулугу адамдар тарабынан бааланганы менен, протеиназа Кнын өтө эле төмөн деңгээлде болушунан улам, протеиназа Кны өндүрүүгө аз гана ата мекендик компаниялар катышканы өкүнүчтүү. Адамдар протеиназа К өндүрүшүн түзгүсү келгенде Өндүрүш процессинде протеиназа К өтө өзгөчө белок экени аныкталган. Протеиназа Кнын өндүрүш кубаттуулугун кыска убакыттын ичинде кеңейтүү өтө кыйын.
Протеиназа Кнын ири көлөмдө өндүрүлүшү төмөнкү кыйынчылыктарга туш болот
1. Төмөнкү экспрессия
Протеиназа К көпчүлүк белокторду спецификалык эмес түрдө ажыратып, экспрессия кожоюн клеткасына олуттуу ууландыруучу таасир тийгизиши мүмкүн. Ошондуктан, протеиназа К экспрессиясынын деңгээли, адатта, өтө төмөн. Протеиназа Кны жогорку деңгээлде экспрессиялаган экспрессия системаларын жана штаммдарды скринингдөө, адатта, узак циклди талап кылат.
2. Пигменттердин жана нуклеин кислоталарынын калдыктары
Ири масштабдуу ачытуу көп өлчөмдөгү пигментти жана кожоюн нуклеин кислотасынын калдыктарын киргизет. Бул кошулмаларды жөнөкөй тазалоо процесси менен жок кылуу кыйын, ал эми татаал тазалоо чыгымдарды көбөйтүп, калыбына келтирүү ылдамдыгын төмөндөтөт.
3. Туруксуздук
Протеиназа К жетиштүү деңгээлде туруктуу эмес, ал өзүн-өзү ферменттештире алат жана аны коргоочу агентсиз 37°C температурада узак убакыт бою туруктуу сактоо кыйын.
4. Оңой чөкмө
Протеиназа Кнын тоңдурулуп кургатылган порошогун даярдоодо, тоңдурулуп кургатылган порошоктогу протеиназа Кнын катуу курамы көп болушун камсыз кылуу үчүн, жогорку концентрацияда тоңдурулуп кургатылган коргоочу агентти кошуу керек, бирок протеиназа Кнын концентрациясы 20 мг/мл жана андан жогору жеткенде, агрегация оңой эле чөкмө пайда болот, бул катуу курамы жогору протеиназа Кны тоңдурулуп кургатууда чоң кыйынчылыктарды жаратат.
5. Ири инвестициялар
Протеиназа К күчтүү протеаза активдүүлүгүнө ээ жана лабораторияда башка протеазаларды гидролиздей алат. Ошондуктан, протеиназа К изилдөө жана иштеп чыгуу жана өндүрүү үчүн атайын өндүрүш аймактарын, жабдууларды жана персоналды талап кылат.
XD BIOCHEM протеиназа К эритмеси
XD BIOCHEM компаниясынын протеинди экспрессиялоо жана тазалоо платформасы жетилген жана рекомбинанттык протеиндерди экспрессиялоо жана тазалоо, ошондой эле өндүрүш процесстерин оптималдаштыруу жаатында бай тажрыйбага ээ. Изилдөө жана иштеп чыгуу тобунун тез түзүлүшү аркылуу протеиназа Кнын ири масштабдуу өндүрүш процесси жеңип чыкты. Тоңдурулуп кургатылган порошоктун айлык өндүрүшү 30 кг ашык. Продукция туруктуу иштөөгө, жогорку ферменттик активдүүлүккө жана хост цитохромунун жана нуклеин кислотасынын калдыктарына ээ эмес. XD BIOCHEM менен байланышууга кош келиңиз. Сыноо пакетин алыңыз (Электрондук почта:sales@xdbiochem.comТел.: +86 513 81163739).
XD BIOCHEMдин техникалык чечимдери төмөнкүлөрдү камтыйт
Көп көчүрмөлүү плазмидалык интеграцияны колдонуу менен, экспрессия деңгээли 8 г/л болгон жогорку экспрессиялуу штаммдар тандалып алынат, бул протеиназа К экспрессия деңгээлинин төмөндүгүнүн көйгөйүн чечет.
Көп баскычтуу тазалоо процессин түзүү аркылуу, протеиназа Кнын цитохрому жана нуклеин кислотасынын калдыктары стандарттык мааниден төмөн деңгээлде ийгиликтүү алынып салынды.
Коргоочу буфердик формулаларды жогорку өндүрүмдүүлүк менен скринингдөө аркылуу протеиназа Кны 37°C температурада туруктуу сактай алган буфер тандалып алынган.
Скринингдик буферлер протеиназа К жогорку концентрацияларда агрегацияланып, чөкмөлүү болушу мүмкүн деген көйгөйдү чечет жана протеиназа Кнын катуу курамы жогору болгон тоңдуруу менен кургатуунун негизин түзөт.
XD BIOCHEM протеиназа К үлгүсү
XD BIOCHEM протеиназа К туруктуулук тести: бөлмө температурасында 80 күндөн кийин активдүүлүктө олуттуу өзгөрүү болбойт
XD BIOCHEM протеиназа К туруктуулук тести: бөлмө температурасында 80 күндөн кийин активдүүлүктө олуттуу өзгөрүү болбойт.
XD BIOCHEM протеиназа К жана атаандаш продуктулардын нуклеин кислотасын экстракциялоо эффектин салыштыруу. Нуклеин кислотасын экстракциялоо процессинде тиешелүүлүгүнө жараша XD BIOCHEM жана атаандаш протеиназа К колдонулат. XD BIOCHEM протеиназа К экстракциялоо эффективдүүлүгү жогору жана максаттуу гендин Ct мааниси төмөн.
Жарыяланган убактысы: 2021-жылдын 31-декабры